《铁鹰行动》将故事置于20世纪90年代初。那时，一伙自称东北虎、西北狼的不法分子打着南下支队的旗号，在我国绵和的铁路客运线上横行作案。这些车匪路霸行事凶狠狡猾，作案往往出其不意，又凭借现代化交通工具迅速逃离现场，给旅客的生命财产安全带来严重威胁。
犯罪团伙的头目二盖子由高发饰演，绰号东北虎。他不仅心狠手辣，还擅长乔装成各种身份，是一个极其危险的高智商罪犯。面对日益猖獗的铁路犯罪，公安部和铁道部公安局高度重视。为维护共和国法律尊严、保障广大旅客安全，铁道部公安局副局长李威由陈剑飞饰演，亲自带队，率领铁路公安系统其余四位五虎上将，组建铁鹰刑警队。队员中有百发百中的神枪手枪神、精通飞刀的刀子、防爆专家闷雷，以及公安散打女冠军刺梅。上级对这支队伍只有一个要求：不能挂彩、不能伤残，谁挂彩，谁离队。此刻，铁鹰已经张开翅膀。
